Встроенная обработка данных с помощью ультрафиолетового детектора DWD - 1 (высокопроизводительного двухлучевого двухволнового детектора)

Диапазон длин волн: 254 нм, 280 нм (одновременное обнаружение) и две дополнительные длины волн для одновременного обнаружения между спектральными линиями 254 нм и 280 нм - 400 нм.

* Особенности прибора DWD - 1

Двухволновое определение белка 280 нм / 254нм:

Белковые молекулы содержат ароматические аминокислоты, такие как сопряжённые двойные связи тирозин и триптофан. Они обладают свойствами поглощения ультрафиолетового света, пик поглощения которого находится на длине волны 280 нм, и значение плотности света на пике поглощения в этой длине волны прямо пропорционально его концентрации, поэтому они могут служить основой для качественного и количественного измерения белка, поэтому ультрафиолетовое поглощение на 280 нм обычно используется для непрерывного мониторинга концентрации белка в системе слоистости. Однако из - за различного содержания тирозина и триптофана в различных белках для точной количественной оценки необходимо, чтобы чистый продукт белка был измерен в качестве стандарта для сравнения или чтобы его коэффициент экстинкции был известен в качестве ссылки. Кроме того, многие не белковые вещества также имеют - постоянную абсорбционную способность при длине волны 280 нм, могут вызывать помехи. Особенно сильное воздействие оказывают нуклеиновые кислоты (пурин и пиримидин). Поглощение на 280 нм в 10 раз сильнее, чем поглощение белка (на грамм), но нуклеиновые кислоты поглощаются сильнее на 254 нм, а их пик поглощения находится вблизи 254 нм. Коэффициент экстинкции нуклеиновой кислоты 254нм в два раза выше, чем 280нм,

В отличие от белков, 280 нм ультрафиолетового поглощения больше, чем 254 нм поглощения.

ОбычноА.

Коэффициент поглощения света чистыми белками: A280 / A254 1.8

Коэффициент светопоглощения чистых нуклеиновых кислот: A280 / A254 0.5

Таким образом, при одновременном присутствии нуклеиновых кислот в белковом растворе (как и в большинстве биологических систем), OD254nm должен быть измерен одновременно с OD280nm. Затем, исходя из соотношения поглощения двух длин волн, истинное содержание белка было скорректировано эмпирической формулой, чтобы устранить влияние нуклеиновой кислоты.

Концентрация белка = 1,45 × A280 - 0,74 × A254 (мг / мл)

Эта эмпирическая формула была построена на основе данных, измеренных с помощью ряда известных смесей белков (дрожжевых энозидазы) и нуклеиновых кислот (дрожжевых нуклеиновых кислот) в различных концентрациях.